HRGCMS = High Resolution Gas Chromatogrraphy Mass Spectrometry
I risultati, per il contenuto di diossine, ottenuti con i metodi di screening come il DR CALUX® vengono espressi in CALUX-TEQs, mentre quelli ottenuti dall’analisi con HRGC-HRMS vengono espressi in WHO-TEQs. C’è differenza? Qual è la relazione tra questi due modi di esprimere i risultati?
Questa è una domanda molto comune, in quanto queste due espressioni dei risultati possono sembrare diverse e pertanto creare una certa confusione. Esse derivano da un confronto scientifico a livello internazionale. Attualmente, l’opinione che prevale è che il WHO-TEQ dovrebbe essere usato solo per l’espressione di risultati ottenuti attraverso l’applicazione dei valori di TEF (Toxicity Equivalence Factor) definiti dal WHO (World Health Organization). E’ questo il caso di tutti i metodi analitici-chimici, come ad esempio la HRGC-HRMS (gas-cromatografia / spettrometria di massa ad alta risoluzione), i quali determinano le concentrazioni dei singoli congeneri (ad esempio in pg/g di grasso) e queste concentrazioni vengono successivamente convertite in tossicità totale equivalente (WHO-TEQ) grazie all’utilizzo dei valori di TEF specifici, definiti dalla WHO per ogni congenere. Dato che il WHO ha modificato diverse volte i valori di WHO-TEF per i singoli congeneri, è anche richiesto di specificare quale versione è stata utilizzata nell’elaborazione dei risultati (es. 1989 (I-TEQ); 1998, o 2006 WHO-TEQ).
I metodi di screening per le diossine accettati dall’UE, come il DR CALUX®, misurano direttamente la tossicità totale equivalente (TEQ) delle diossine e pertanto non necessitano della conversione dei dati tramite i valori di WHO-TEF dei singoli congeneri. Per questo motivo, i risultati ottenuti con il CALUX non dovrebbero essere espressi in WHO-TEQ ma piuttosto in CALUX-TEQ, anche se questo in realtà equivale al WHO-TEQ. L’equivalenza tra CALUX-TEQ e WHO-TEQ si basa sulle seguenti osservazioni ed argomentazioni:
1) I valori di TEF per i singoli congeneri fissati dal WHO, si basano principalmente sui dati di tossicità epatica relativa, che è lo stesso principio su cui si basa il metodo DR CALUX®. Infatti, questo metodo di screening utilizza l’induzione enzimatica come misura della tossicità epatica con l’utilizzo della linea cellulare H4IIe che è la stessa utilizzata anche da Safe et al., 1989 per lo sviluppo di tutto il concetto di TEF.
2) I valori di TEF per i singoli congeneri delle diossine che si ottengono con il metodo DR CALUX® sono paragonabili a quelli definiti dal WHO per gli stessi congeneri.
3) I valori di CALUX-TEQ che si ottengono per i campioni, sono paragonabili a quelli di WHO-TEQ ottenuti con metodica HRGC-HRMS per gli stessi campioni.
In conclusione, l’unica reale differenza tra CALUX-TEQ e WHO-TEQ riguarda la metodica utilizzata per la determinazione: il metodo CALUX misura direttamente la tossicità totale equivalente, mentre il metodo HRGC-HRMS determina prima la concentrazione dei singoli congeneri (pg/g) che vengono poi convertite in tossicità equivalente, le tossicità equivalenti dei singoli congeneri vengono sommate per ottenere la tossicità totale equivalente, espressa in WHO-TEQ. Pertanto, i risultati che si ottengono con entrambi i metodi non sono identici, ma equivalenti l’uno all’altro. Inoltre, la legislazione dell’UE richiede la conferma con metodo HRGC-HRMS di ogni risultato ottenuto con il metodo DR CALUX® che supera il limite massimo fissato dall’UE. Possiamo quindi concludere che tutte le valutazioni finali dei prodotti, che definiscono se il prodotto sia sopra il limite di legge oppure no, si basano sul WHO-TEQ.